ATCC15834 100ul*100

ATCC15834 100ul*100以下是的订购信息储存条件：-70℃冻存
操作方法:
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。
2.每100 μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA（转化效率较高，*次使用前做预实验确定所加质粒的量），用手管底混匀，依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
ATCC15834 100ul*1003. 加入700 μl无抗生素的LB或YEB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。
4. 6000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天
注意事项
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
ATCC15834 100ul*1002. 混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。
3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量。
4. *浓度不应高于25 μg/ml，过高的*浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50 μg/ml kan，若所用平板含有20 μg/ml rif则转化效率降低到1/2。
5. 培养基中加入*的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入Ti质粒筛选抗生素可防止Ti质粒丢失，但Ti质粒筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑这些抗生素，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。

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MCP-4/CCL13 人单核细胞趋化蛋白4 规格： 48T/96T

MCP-3/CCL7 人单核细胞趋化蛋白3 规格： 48T/96T

MCP-2/CCL8 人单核细胞趋化蛋白2 规格： 48T/96T

HSV-Ag2 人单纯疱疹病毒抗原2 规格： 48T/96T

HSV-Ag1 人单纯疱疹病毒抗原-1 规格： 48T/96T

HSV-Ag1 人单纯疱疹病毒抗原-1 规格： 48T/96T

HSVⅡ-Ab 人单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体 规格： 48T/96T

MAO 人单胺氧化酶 规格： 48T/96T

Big ET 人大内皮素 规格： 48T/96T

Big ET 人大内皮素 规格： 48T/96T

colicin 人大肠菌素 规格： 48T/96T

CCSA-4 人大肠癌专一抗原4 规格： 48T/96T

CCSA-3 人大肠癌专一抗原3 规格： 48T/96T

CCSA-2 人大肠癌专一抗原2 规格： 48T/96T

PRL 人催乳素 规格： 48T/96T

MF/MPF 人促有丝分裂因子 规格： 48T/96T

GnRH 人*释放激素 规格： 48T/96T

DSIP 人促睡眠肽 规格： 48T/96T

GHRH 人促生长激素释放激素 规格： 48T/96T

ACTH 人促肾上腺皮质激素 规格： 48T/96T

CRH 人促肾上皮质激素释放激素 规格： 48T/96T

FSH 人促卵泡素 规格： 48T/96T

TRH 人促甲状腺素释放激素 规格： 48T/96T

TSH 人促甲状腺素 规格： 48T/96T

TSHR 人促甲状腺激素受体抗体 规格： 48T/96T

LH * 规格： 48T/96T

人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3 人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3 规格： 48T/96T

E3 人雌三醇 规格： 48T/96T

E 人雌激素 规格： 48T/96T

ER 人雌二醇受体 规格： 48T/96T

E2 人雌二醇 规格： 48T/96T

PACAP 人垂体腺苷酸环化酶激活肽 规格： 48T/96T

VMA 人垂草扁桃酸 规格： 48T/96T

PF/PFP 人穿孔素/成孔蛋白 规格： 48T/96T

PF/PFP 人穿孔素/成孔蛋白 规格： 48T/96T

VLA 人迟现抗原 规格： 48T/96T

ATCC15834 100ul*100VLA 人迟现抗原 规格： 48T/96T

MPF 人成熟促进因子 规格： 48T/96T

OGP 人成骨生长肽 规格： 48T/96T

SOD 人超氧化物歧化酶 规格： 48T/96T

hs-CRP 人超敏C反应蛋白 规格： 48T/96T

4 向每个离心管中加入900 μl 无菌的SOC 或LB 培养基（不含抗生素）， 混匀后置于37℃摇床振荡培养1 小时（160-220 转/分钟），目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
C58C1 电 50ul*105 将离心管内容物混匀，吸取100 μl 已转化的 加到含相应抗生素的SOB 或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37℃培养12-16 小时。
● 涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA 总量较多，可取更少量转化产物涂布平板；反之，如转化的DNA 总量较少，可取200-300 μl 转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少，可通过离心（4,000 rpm, 2分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板）
注意事项
1. 应保存在 -70℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免降低 的转化效率。
2. 进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
3 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到低。
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